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                          在儲存純化蛋白質時保持涼爽

                          蛋白質及其功能的研究對于理解生物學**關重要,但從復雜混合物中分離和純化單一蛋白質是一項艱苦的工作。投入時間后,使用各種色譜法純化目標蛋白質 方法,由于儲存不當而失去蛋白質完整性將是毀滅性的。如果您需要將蛋白質用于多個下游研究,良好的儲存條件尤為重要。您可能需要長時間儲存??您的制劑,并且一些實驗要求蛋白質保持其原始結構,結合親和力或酶活性。**佳的儲存條件是每種蛋白質和情況都不同的; 盡管如此,有可能提出一些蛋白質儲存和穩定性的一般指導原則。以下是一些快速簡單的建議,涉及濃度,添加劑,樣品大小和儲存溫度,以便在儲存蛋白質以備將來使用時考慮。

                          濃度

                          濃度在保持蛋白質在溶液中穩定方面起著**作用。蛋白質需要以高濃度儲存 - **少1 mg / ml。稀釋蛋白質溶液(<1 mg / ml)由于與儲存管的低水平結合而更容易失活和損失。因為在某些情況下濃度較高可能不太現實,所以通常的做法是將“載體”或“填充物”蛋白質(如純化的牛血清白蛋白(BSA))加入1**5 mg / ml(0.1%)**0.5%),稀釋蛋白質溶液并防止這種降解和損失。

                          添加劑

                          可以將許多化合物添加到蛋白質溶液中以延長保質期。您添加到蛋白質溶液中的含量取決于預期用途和純化蛋白質的特性。例如,如果您純化了用于蛋白質印跡或**沉淀實驗等分析的抗體蛋白,您可以添加冷凍保護劑(如甘油或乙二醇)**終濃度為25%**50%,以幫助穩定蛋白質。這些添加劑有助于防止溶液在冷凍(-20°C)時凝固,防止形成破壞蛋白質結構的冰晶。聚乙二醇(PEG)和聚山梨醇酯(如吐溫80)等聚合物也可以幫助保持冰晶,但濃度低得多(0.01%)。因為你的蛋白質制劑不會結冰,它可以多次使用而無需解凍。此外,在此濃度下,吐溫80還可以幫助防止蛋白質與儲存管結合。但是,冷凍保護劑雜質可能會影響蛋白質活性,因此您可能需要通過與供應商核實來采取措施確保所選試劑的質量。另一個考慮因素是盡管這些添加劑有利于抗體使用,但高粘度會影響某些下游程序中的蛋白質使用,例如額外的色譜步驟,蛋白質結合/相互作用測定或質譜分析,因此應考慮其他應用。因此,您可能需要通過與供應商核實,采取措施確保所選試劑的質量。另一個考慮因素是盡管這些添加劑有利于抗體使用,但高粘度會影響某些下游程序中的蛋白質使用,例如額外的色譜步驟,蛋白質結合/相互作用測定或質譜分析,因此應考慮其他應用。因此,您可能需要通過與供應商核實,采取措施確保所選試劑的質量。另一個考慮因素是盡管這些添加劑有利于抗體使用,但高粘度會影響某些下游程序中的蛋白質使用,例如額外的色譜步驟,蛋白質結合/相互作用測定或質譜分析,因此應考慮其他應用。

                          可以添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質的蛋白水解切割,從而保持蛋白質完整。**終濃度為0.02%**0.05%(w / v)的抗菌劑如疊氮化鈉(NaN3)或終濃度為0.01%(w / v)的硫柳汞抑制微生物生長。金屬螯合劑如EDTA的終濃度為1**5mM,避免了金屬誘導的巰基(-SH)基團的氧化,并有助于將蛋白質維持在還原狀態。**終濃度為1**5mM的還原劑如二硫蘇糖醇(DTT)或2-巰基乙醇(2-ME)也有助于通過防止半胱氨酸的氧化將蛋白質維持在還原狀態。在將添加劑與蛋白質混合時,請記住,蛋白質溶液不應通過渦旋劇烈搖動。

                          如您所見,有許多添加劑選擇。Bio-Rad等供應商提供方便尺寸的試劑,并提供使用添加劑的方案和提示。請務必閱讀并規劃下游實驗,以確保正確的儲存條件。

                          樣本量

                          如果您確定使用甘油或乙二醇對您的應用不利,并且因為凍融循環會降低蛋白質的穩定性,您應該分配并準備一次性等分試樣,這樣一旦解凍,蛋白質溶液就不必是再冷凍。這些小等分試樣可以使用一次。訣竅是提前計劃并避免多次凍融循環。

                          溫度

                          通常,蛋白質**好在≤4°C的溫度下儲存在干凈,無菌的玻璃容器或聚丙烯管中。在室溫下儲存經常導致蛋白質降解和/或不活動。對于短期儲存****幾周,許多蛋白質可以儲存在含有蛋白酶抑制劑的簡單緩沖液中,溫度為4°C。對于中期儲存,一個月到一年,在-20°C或-80°C冷凍是更常見的冷蛋白儲存形式。對于長達一年的嚴重長期儲存,一些研究人員選擇在液氮中將一次性蛋白質等分試樣用于在液氮下儲存在干凈的塑料容器中。該方法包括將蛋白質溶液逐滴(約100μl/滴)加入液氮池中,然后收集液滴大小的冷凍珠并在液氮下將它們儲存在冷凍瓶中。根據您的情況和蛋白質的特性,您可能會偏好一個存儲溫度和存儲持續時間。請務必牢記預期的應用程序。

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