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                          使用這些室溫DNA存儲解決方案釋放您的冰箱

                          這是一個與分子生物學本身一樣古老的格言:你不會將DNA存儲在工作臺上。DNA通常在-20°C,-80°C甚**液氮中冷凍保存,需要大量資金和經常性成本以及空間 - 更不用說冷凍機停機時的瘋狂爭奪。類似地,用冷卻塊或干冰運輸冷凍DNA是昂貴的,可能需要特殊的文書工作和處理,并且如果有延遲則存在腐敗的風險。

                          但是有一種更溫暖,更簡單的替代方案:用于在室溫下儲存和運輸DNA的系統。在這里,我們探索您的選擇

                          Guelph大學安大略省生物多樣性研究所的**DNA科學家Natalia Ivanova指出,保存DNA而不凍結的一種方法是將其與某種纖維材料結合  。

                          例如,Whatman FTA卡采用涂層纖維素膜,DNA將纏繞在其中。起始樣品可以與血液,細菌培養物或純化的DNA一樣多樣化,化學涂層將溶解細胞并保護樣品DNA免受核酸酶和氧化,紫外線和微生物降解。根據現在擁有Whatman的GE Healthcare Life Sciences 的  產品文獻(PDF),“室溫下儲存在FTA卡上的基因組DNA數據顯示,血液樣本的DNA穩定性超過20年。”

                          但伊萬諾娃警告稱,“洗脫DNA并不容易”,需要一系列基于實驗室的洗滌來清除污染物; 相反,沖頭通常取自FTA卡并直接用于下游應用,例如PCR。

                          IntegenX的  GenPlates是每個孔中含有6mm FTA圓盤的微量滴定板; 它們具有各種配置,例如三個96孔區域,六個40阱區域和12個16阱區域。將樣品加入孔中并干燥后,用粘合劑蓋密封板以便儲存或運輸。GenPlates可與市售液體處理器一起使用,以幫助實現自動化。

                          其他產品,如Macherey-Nagel的NucleoCard®,可以類似地用于裂解細胞和結合DNA。

                          Whatman**近推出了新系列的FTA Elute卡。在這里,與DNA保持與基質結合的標準FTA卡形成對比,“FTA Elute的化學成分允許蛋白質[例如,來自裂解細胞]保持與卡片基質緊密結合,” 產品說小冊子(PDF),“快速簡便的洗脫步驟,包括水和熱,以獲得純化的單鏈DNA溶液。”

                          玻璃

                          鹽水蝦和緩步動物等無水生物  可以通過保存其玻璃質形式的DNA和其他生物分子(基本上是收縮包裹它們)而在長達一個世紀的干旱中存活。在存在高濃度的二糖(例如海藻糖)的情況下,生物體能夠通過氫鍵可逆地穩定這些極性分子。

                          海藻糖和聚合物聚乙烯醇(PVA)已成功用于法醫學和其他實驗室科學中的核酸冷凍保存。伊萬諾娃和瑪莎Kuzmina測試的這些DIY版本,和市售合成Biomatrica  DNAstable®產品,為他們的相對能力保護DNA四年[1]。他們發現DNAStable板上的存儲在室溫和56°C(模擬加速老化)提供了比DIY解決方案更好的保護,但所有這些都足夠穩定用于運輸目的。

                          Biomatrica的DNAStable有多種形式,包括在管中加入干燥的DNA和加入DNA的96孔和384孔板,以及液體(DNAStable LD),可以添加到客戶選擇的實驗室器具中的樣品中。將樣品在層流罩下或使用真空濃縮器干燥。Biomatrica營銷**Michael Vengrow指出,不需要特殊設備來存放樣品。“但是,為了謹慎起見,我們為產品提供保濕袋和一些干燥劑。”

                          IntegenX提供與Qiagen及其QIAsafe(2013年底停產)類似的產品GenTegra DNA。對于DNAStable和GenTegra DNA,回收僅涉及重建樣品,通常在水中。補液后不需要進行凈化或純化,**成分顯然不會影響下游應用,如PCR,測序和微陣列,UCSF的Eunice Wan及其同事在2009年的一份出版物中寫道[2]。然而,它們確實改變了A230 / 280的比例,可能是因為產品本身優先在230nm處吸收。

                          Biomatrica**近推出了一種新產品DNAStable Plus,它可以使樣品在使用或干燥之前穩定并以液體形式儲存長達六個月,Vengrow指出。該公司還提供專為RNA配制的產品。

                          采樣

                          已知冷凍/解凍循環對DNA完整性具有有害影響,并且通常鼓勵研究人員通過以等分試樣制備樣品來**小化凍/融。

                          在室溫下干燥存儲在Whatman卡片上的DNA可以通過每次從卡上刷新來“重復使用”。類似地,可以對來自GenPlates的單個孔進行取樣而不會干擾其他孔。

                          在化學保存的DNA的情況下,“你可以做多次水合/脫水。我們為每種協議中有多少提供了建議,“Vengrow說。以等分試樣存儲干燥的DNA可以緩解這個問題,但是,Ivanova警告說,稀釋的樣品不能承受多次水合/脫水以及更濃縮的樣品。

                          底線

                          對于擁有過度擁擠的冰柜或博士后樣品檔案的實驗室來說,室溫儲存系統似乎是一種受歡迎的緩解措施。但Ivanova不建議您將所有現有樣品移**室溫儲存。數據并非完整。“對于真正的長期存儲,我仍然會選擇-80 [°C],”她說。但對于沒有這種冰箱的實驗室來說,“在干燥條件下儲存DNA可以在-20°C [℃]儲存時增加額外的安全性。”

                          參考

                          [1] Ivanova,NV,Kuzmina,ML,“室溫下干燥DNA儲存和運輸的協議”,Molecular Ecology Resources,13:890-8,2013。[PubMed ID:23789643 ]

                          [2] Wan,E,et al。,“Green technologies for room temperature nucleic acid storage,”Curr Issues Mol Biol,12:135-42,2009。[PubMed ID:19801719 ]

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